Informe Científico de Investigador
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Examinando Informe Científico de Investigador por Autor "Rabassa, Martín Enrique"
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Acceso Abierto Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2010-2011)(2011) Rabassa, Martín EnriqueDurante este período se analizó la presencia de nanovesículas derivadas de tumores presentes en el plasma de pacientes portadores de cáncer. Se estudió la presencia de exosomas, una variedad de nanovesícula de 40 a 100 nm de diámetro procedente del sistema endosomal, las cuales se acumulan en la circulación periférica de pacientes con cáncer. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. De un total de 41 pacientes con cáncer de mama estudiadas 27/41 (67%) presentaron valores elevados de proteínas en las fracciones correspondientes y 17 de estas 27 (63%) fracciones mostraron marcadores de exosomas y vesículas compatibles en las imágenes de microscopía electrónica. Se analizó la presencia en los exosomas de la mucina humana MUC1, ya que la misma había sido detectada por Staubach S y colegas (2009) en exosomas derivados de la línea de células tumorales de mama MCF7. Mediante el empleo del anticuerpo HMFG1 sólo fue posible determinar la presencia de MUC1 en una sola de las muestras. Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. La presencia de IDO en fracciones de exosomas fue confirmada en 4/12 pacientes con cáncer de mama y su expresión en estas vesículas podría constituir un mecanismo de inmunoevasión tumoral a distancia. Durante este período se inició la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello (Exp 800-8421/11 UNLP) en colaboración con el Dr Martín Abba. Las proteínas romboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. El presente trabajo se encuentra orientado a estudiar la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello y su relación con los parámetros anatomoclínicos de los pacientes. Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico. Otras investigaciones iniciadas en el período anterior se encuentran en desarrollo. En colaboración con el Doctor Miguel Pasquale del INIFTA se estableció un modelo de estudio de isquemia in vitro (coverslip hypoxia) orientado a estudiar el efecto de la misma sobre la expresión de MUC1 y la producción de exosomas en líneas celulares. - Informe de investigador
Acceso Abierto Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2012)(2012) Rabassa, Martín EnriqueDurante el período correspondiente al año 2012 se estudió la presencia de exosomas en el plasma de pacientes con tumroes de cáncer de mama y a partir del medio condicionado de líneas celulares. Los exosomas son pequeñas vesículas de menos de 100 nm de diámetro que son liberadas desde el compartimento endosomal de diversas células y en particular por las células tumorales. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. Se analizó la presencia en los exosomas de la lectina humana GAL1 mediante el empleo del anticuerpo policlonal de conejo y fue posible determinar la presencia de GAL1 en el 32% de las muestras y en las líneas tumorales humanas MCF7 y T47D y en las murinas B16 y 4T1 (Trabajo en preparación en colaboracion conel Dr G Rabinovich, CONICET). Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. Empleando Western blot se hallaron 4/11 muestras positivas. (Trabajo en preparación en colaboración con la Dra Isla Larrain, CIC-PBA) Se analizó la expresión nuclear de la mucina humana MUC1 en tumores de cabeza y cuello, colon y mama mediante inmunohistoquímica y Western blot. En particular se estudió la presencia de la porción extracelular, la cual a sido recientemente asociada con las motas nucleares. (Trabajo terminado, aun no enviado para su publicación) Durante este período se continuó la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello en colaboración con el Dr Martín Abba (CONICET) Las proeteínas rhomboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. En el presente trabajo se estudió la expresión de la proteína RHBDD2 en 124 pacientes con tumores de cabeza y cuello. El manuscrito se encuentra en preparación. En relación con el mismo tema pero en líneas de cáncer de colon se analizó la expresión de RHBDD2 a nivel de microcopía electrónica (Trabajo publicado) Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP-CONICET, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico - Informe de investigador
Acceso Abierto Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2013)(2013) Rabassa, Martín EnriqueEn este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de distintas localizaciones. Se analizó la mucina MUC1 y proteínas del grupo Rhomboide. Los ensayos estuvieron orientados a analizar la presencia de la porción extracelular de MUC1 en el núcleo celular. La mucina MUC1 consta de dos dominios, uno pequeño anclado a la membrana plasmática, el cual posee una porción intracelular relacionado con el control de señales intracelulares y otro mayor, unido de forma no covalente al menor y ubicado en el exterior celular. Esta porción se encuentra ampliamente glicosilada y se relaciona con la defensa de la célula epitelial frente a noxas o patógenos. El dominio menor puede observarse en diversas localizaciones subcelulares tales como la mitocondria o el núcleo celular. Allí interviene en la regulación de otros procesos de señales celulares, así como también la regulación de la expresión de genes. En trabajos previos de nuestro Centro habían detectado la presencia del dominio extracelular de MUC1 (MUC1-N) en el núcleo de la célula tumoral. Sin embargo, este fenómeno no había sido evaluado exhaustivamente en una serie de pacientes portadores de tumores. Con tal fin se analizó la detección de la porción extracelular de la mucina MUC1 en fracciones enriquecidas en núcleos de líneas celulares tumorales y en cortes de tumores de cabeza y cuello, colon y mama. Se observó que un porcentaje significativo de tumores de mama presentan esta localización particular de MUC1 mientras que en los tumores de cabeza y cuello y colon es un evento infrecuente. También se observó que es posible su aislamiento a partir de varias líneas celulares de cáncer de mama. (Rabassa et al, International Journal of Biological Markers, 2015) Por otra parte, se analizaron proteínas del grupo rhomboide con el objetivo de determinar la presencia de sus mRNA en exosomas del plasma de pacientes portadoras de cáncer de mama. La expresión del mRNA de algunas proteínas rhomboides se encuentran asociadas con el desarrollo de metastasis y la respuesta a drogas antineoplásicas. Su función específica no se conoce, aunque estudios recientes han observado que se localizan en el Aaparato de Golgi. A partir de las vesículas se extrajo mRNA el cual fue aislado y retrotranscripto a cDNA. A continuación se procedió a la evaluación de la expresión de diversos mRNA empleando rtPCR y sondas dirigidas contra actina y las proteínas RHBDD1, RHBDD2 y RHBDD3. Para este estudio se utilizó un pool de muestras de estadío I versus otro pool de muestras de estadios II y III de cáncer de mama. Los hallazgos muestran que no es posible detectar mRNA de RHBDD3 en exosomas circulantes de pacientes con cáncer de mama en ninguno de sus estadios mientras que RHBDD2 fue detectado en ambos pooles. Finalmente RHBDD1 sólo fue observado en las muestras en estadíos II y III lo que permite sospechar alguna relación con el proceso de desarrollo tumoral y lo cual se procederá a evaluar inmediatamente en mayor detalle. (trabajo en preparación). - Informe de investigador
Acceso Abierto Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2015)(2015) Rabassa, Martín EnriqueEn este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de cabeza y cuello y en otras localizaciones como tumores de mama y tumores de colon. Principalmente se analizó la expresión de antígenos glusídicos del grupo Lewis (lewis x y sialil Lewis x , moléculas que se hallan relacionadas con la progresión tumoral y la diseminación metastásica) y la mucina humana MUC1. Por otra parte se iniciaron las tareas de investigación referidas al aislamiento y caracterización de microvesiculas y exosomas de plasma humano obtenidas de pacientes portadoras de cáncer de mama.