Informes de Investigación

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Examinando Informes de Investigación por Autor "Franco, María Fiorella"

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  • Informe de becario
    Acceso Abierto
    Informe científico de Beca de Estudio: Franco, María Fiorella (2014-2015)
    (2015) Franco, María Fiorella
    Las tareas de investigación desarrolladas se detallan a continuación: 1. Colecta: Se realizó la colecta de las diferentes especies de gramíneas a estudiar, durante su estado reproductivo. Las especies nativas y naturalizadas del Sudeste Bonaerense, que fueron colectadas fueron: Lolium multiflorum; Thinopyrum ponticum (=Agropyron elongatum); Nasella trichotoma (=Stipa trichotoma), N. neesiana (=S. neesiana), N. megapotamia (=S. megapotamia). Sporobolus indicus, y Botriochloa laguroides (especies de valor forrajero) y Poa iridifolia (de valor ornamental). Para ello, se organizaron y realizaron viajes de colecta junto a un docente de la asignatura Botánica Agrícola (asesor de mi Tesis de Maestría). En los mismos se muestrearon de 2-4 poblaciones/especie. Esto permitió obtener un total de 24 poblaciones. De cada población se cosecharon 30 plantas. El método de cosecha fue por derivación (las semillas provenientes de cada planta se almacenaron en sobres individuales). Una vez obtenidas las semillas de las plantas, se mantuvieron por 72 hs a temperatura ambiente para favorecer la pérdida de humedad y evitar contaminaciones posteriores con patógenos. Transcurrido este período de secado, las semillas se almacenaron en una cámara fría a 4°C de temperatura y 4%-5% de humedad relativa. Debido a la dificultad para acceder a los sitios de origen de las especies Festuca pampeana y F. ventanícola (propuestas en el plan original) las mismas fueron reemplazadas por Botriochloa laguroides y Sporobolus indicus, considerando, además, la importancia de estas últimas como forrajeras. 2. Diagnóstico de endófito: Se llevó a cabo el diagnóstico de la presencia del hongo endófito Epichloë spp. (ex Neotyphodium) en las semillas colectadas. De cada poblacion cosechada se tomaron 90 semillas (3 semillas/planta). Para efectuar el diagnóstico se realizó un pretratamiento de las mismas, el cual consistió en sumergirlas en hidróxido de sodio (NaOH) durante un período de 15-16 hs a temperatura ambiente. Transcurrido este período, se procedió a enjuagar las semillas, separarles las brácteas mediante la utilización de agujas histológicas previamente esterilizadas, y efectuar su tinción directa con el colorante rosa de bengala durante 2-3 minutos. Se realizó la observación individual de las células aleuroníferas bajo miscroscopio óptico (Aumento 400x). Como resultado de esta actividad: solamente se detectó la presencia del endófito en la especie Lolium multiflorum Lam. Las 3 poblaciones colectadas de esta especie mostraron elevados niveles de infección con el endófito: 93.33%, 66,66% y 62,22% respectivamente. Las restantes especies estudiadas estuvieron libres de infección con el endófito. 3. Siembra de semillas y poder germinativo: Se sembraron las tres poblaciones de Lolium multiflorum. Debido a que en cada población colectada se encontraron plantas infectadas (E+) y no infectadas (E-) con el hongo, no fue necesaria la siembra de semillas E+ y aplicación de fungicidas para matar al hongo tal como se había propuesto en el plan de trabajo original. En este sentido se tomaron 50 semillas E+ y 50 semillas E- de cada una de las tres poblaciones de L. multiflorum. Las mismas se sembraron en bandejas de germinación, se llevaron a heladera a 8°C por 48 hs para romper la dormancia. Luego se llevaron 14 días a cámara a 25°C. Pasado este período se realizó el poder germinativo de las semillas de las tres poblaciones. Se obtuvieron altos valores de poder germinativo. Para las plantas infectadas los valores fueron de 96.7%, 96.77 y 100% para las tres poblaciones respectivamente; y para las plantas libres de infección fueron: 83.88%, 72.42% y 96.77% respectivamente. 4. Transplante en invernáculo: Las plántulas obtenidas fueron transplantadas a los 14 días en un invernáculo de la UIB (Unidad Integrada Balcarce. FCA-EEA INTA Balcarce), bajo un Diseño Completo Aleatorizado con arreglo factorial con 25 repeticiones. Los tratamientos estuvieron constituídos por la combinación del factor "Población" con el factor "Condición de la infeccion". Los mismos fueron: Pob 1-E+, Pob 1-E-, Pob 2-E+, Pob 2-E-, Pob 3-E+, Pob 3-E-. La unidad experimental fue cada maceta con una planta. El ensayo se regó en forma diaria. 5. Cortes y fijación del material: Cuando las plantas cumplieron los 70 días de edad (contando desde su siembra en bandeja), se procedió a cortar 3 láminas y 3 vainas de cada planta, las cuales fueron colocadas en tubos Falcon individuales con FAA (formol: alcohol: ac. acético en proporción 2:10:1) para su conservación hasta el momento de realización de los cortes histológicos foliares. También a los 70 días se cortaron varias raíces de cada planta y se comenzó con el protocolo para efectuar posteriormente los recuentos cromosómicos. 6. Recuento cromosómico de Lolium multiflorum: Las raíces cortadas cuando las plantas alcanzaron los 70 días de edad se colocaron en forma individual en frascos de vidrio con 8-hidroxiquinoleina 0,002M durante 4h (para la detención del huso mitótico). Transcurrido ese tiempo se fijaron en una solución de etanol y ácido acético (3:1, v/v) durante 24h y se almacenaron en etanol 70%, a 4°C hasta el momento de efectuar los recuentos. Se comenzaron a realizar los recuentos cromosómicos. Para ello las raíces fijadas, se hidrolizaron en HCl 1N a 60ºC durante 10 min y se colorearon con fuccina durante una hora. La observación y recuento al microscopio óptico se realizó con aumentos de 400x y 1000x. Esta tarea aún se esta llevando a cabo.
  • Informe de becario
    Acceso Abierto
    Informe científico de Beca de Estudio: Franco, María Fiorella (2014-2016)
    (2016) Franco, María Fiorella
    Las tareas de investigación desarrolladas se detallan a continuación: 1. Colecta del material: Se realizó la colección de las diferentes especies de gramíneas a estudiar, durante su estado reproductivo. Las especies nativas y naturalizadas del SE bonaerense, que se colectaron fueron: Lolium multiflorum; Thinopyrum ponticum; Nasella trichotoma, N. neesiana, N. megapotamia; Sporobolus indicus, y Botriochloa laguroides (especies de valor forrajero) y Poa iridifolia (de valor ornamental). Para ello, se organizaron y realizaron viajes a diferentes ambientes del sudeste bonaerense. En los mismos se muestrearon de 2-4 poblaciones/especie. Esto permitió obtener un total de 24 poblaciones. De cada población se coleccionaron 30 plantas. Para efectuar la cosecha de las semillas, de cada planta se seleccionaron y cortaron las inflorescencias correspondientes. Dicha cosecha se llevó a cabo de manera individual (las inflorescencias provenientes de cada planta se guardaron en sobres individuales, manteniéndose así la identidad por planta). 2. Conservación y acondicionamiento del material Las inflorescencias obtenidas se mantuvieron por 72 horas a temperatura ambiente para favorecer la pérdida de humedad y evitar ulteriores contaminaciones con patógenos. Posteriormente se almacenaron en una cámara fría de la Unidad Integrada Balcarce (UIB: FCA- UNMdP/ EEA INTA) a 4°C de temperatura y 4-5% de humedad relativa. Durante esta etapa, se procedió a efectuar la trilla del material a fin de acondicionarlo para su utilización. Así, para cada inflorescencia se llevó a cabo la separación manual de las semillas, descartando los elementos remanentes (pedicelos, raquis, restos de glumas). En esta etapa también se corroboró la pureza de las semillas, eliminando cualquier material extraño que pudiese estar contaminando las muestras. Las semillas, limpias y puras, se almacenaron nuevamente en las cámaras hasta el momento de su utilización. 2. Diagnóstico de endófito: El diagnóstico de la presencia del endófito en las semillas colectadas se llevó a cabo en laboratorio mediante análisis microscópico. Para cada población se analizaron 90 semillas (3 semillas/planta). Para ello, se realizó un pretratamiento de las mismas que consistió en sumergirlas en hidróxido de sodio [Na (OH)] al 5% a temperatura ambiente por 12 horas para permitir su ablandamiento. Al cabo de este tiempo las semillas se enjuagaron con agua y se colocaron individualmente sobre un portaobjeto para separar las glumelas y proceder a su tinción (coloración directa) con una gota del colorante rosa de Bengala durante 2-3 minutos. Posteriormente se colocó un cubreobjeto sobre el preparado histológico y se observó al microscopio óptico Olympus CHK (400x) si existen (o no) las hifas del hongo entre las células aleuroníferas del endosperma. Al realizar la observación microscópica, si las semillas contenían el endófito eran diagnosticadas como positivas (E+), caso contrario, como negativas (E-). Se calculó el porcentaje de infección de cada población estudiada. Los niveles de infección endofíticos fueron comparados tanto entre las especies como entre las poblaciones (dentro de cada especie) mediante la realización de una prueba de proporciones (Pearson's chi-squared test).