CINIBA

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Directora: Prof. Dra. Amada Segal Eiras.

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    MUCI expression and anti-MUCI serum immune response in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC): A multivariate analysis
    (2006) Pereyra, Adrián; Segal-Eiras, Amada; Croce, María Virginia; Rabassa, Martín Enrique
    Background: HNSCC progression to adjacent tissue and nodes may be mediated by altered glycoproteins and glycolipids such as MUC1 mucin. This report constitutes a detailed statistical study about MUC1 expression and anti-MUC1 immune responses in relation to different clinical and pathological parameters which may be useful to develop new anti HNSCC therapeutic strategies. Patients and methods: Fifty three pre treatment HNSCC patients were included: 26 (49.1%) bearing oral cavity tumors, 17 (32.1%) localized in the larynx and 10 (18.8%) in the pharynx. Three patients (5.7%) were at stage I, 5 (9.4%) stage II, 15 (28.3%) stage III and 30 (56.6%) at stage IV. MUC1 tumor expression was studied by immunohistochemistry employing two anti-MUC1 antibodies: CT33, anti cytoplasmic tail MUC1 polyclonal antibody (Ab) and C595 anti-peptidic core MUC1 monoclonal antibody. Serum levels of MUC1 and free anti-MUC1 antibodies were detected by ELISA and circulating immune complexes (CIC) by precipitation in polyethylene glycol (PEG) 3.5%; MUC1 isolation from circulating immune complexes was performed by protein A-sepharose CL-4B affinity chromatography followed by SDS-PAGE and Western blot. Statistical analysis consisted in Multivariate Principal Component Analysis (PCA); ANOVA test (Tukey's test) was employed to find differences among groups; nonparametrical correlations (Kendall's Tau) were applied when necessary. Statistical significance was set to p < 0.05 in all cases. Results: MUC1 cytoplasmic tail was detected in 40/50 (80%) and MUC1 protein core in 9/50 (18%) samples while serum MUC1 levels were elevated in 8/53 (15%) patients. A significant statistical correlation was found between MUC1 serum levels and anti-MUC1 IgG free antibodies, while a negative correlation between MUC1 serum levels and anti-MUC1 IgM free antibodies was found. Circulating immune complexes were elevated in 16/53 (30%) samples and were also statistically associated with advanced tumor stage. MUC1 was identified as an antigenic component of IgG circulating immune complexes. Moreover, poorly differentiated tumors were inversely correlated with tumor and serum MUC1 detection and positively correlated with node involvement and tumor mass. Conclusion: Possibly, tumor cells produce MUC1 mucin which is liberated to the circulation and captured by IgG antibodies forming MUC1-IgG-CIC. Another interesting conclusion is that poorly differentiated tumors are inversely correlated with tumor and serum MUC1 detection.
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    Breast cancer humoral immune response: involvement of Lewis y through the detection of circulating immune complexes and association with Mucin 1 (MUC1)
    (2009) Isla Larrain, Marina Teresita; Demichelis, Sandra O.; Crespo, Marina; Lacunza, Ezequiel; Barbera, Alberto; Creton, Aldo; Terrier, Francisco; Segal-Eiras, Amada; Croce, María Virginia
    In cancer patients, MUC1 glycoprotein may carry Lewis y which could be involved in immune response. Purposes: 1- to evaluate the presence of Lewis y and MUC1 in circulating immune complexes (Lewis y/CIC and MUC1/CIC, respectively) and their correlation; 2- to analyze the possible presence of Lewis y in carbohydrate chains of tumoral MUC1 glycoprotein and 3- to correlate serum and tissue parameters considered. Pretreatment serum and tissue breast samples from 76 adenocarcinoma, 34 benign and 36 normal specimens were analyzed. Anti-MUC1 and anti-Lewis y MAbs were employed. To detect Lewis y/CIC and MUC1/CIC, ELISA tests were developed; serum samples containing MUC1 were previously selected by Cancer Associated Serum Antigen (CASA). Immunoprecipitation (IP) was performed in 9 malignant, benign and normal samples and analyzed by SDS-PAGE and Western blot. Lewis y and MUC1 expression was studied by immunohistochemistry (IHC). Statistical analysis was performed employing principal component analysis (PCA), ANOVA, Tukey HSD, Chi square test and classical correlation (p < 0.05). By ELISA, Lewis y/IgM/CIC levels showed statistically significant differences between breast cancer versus benign and normal samples; mean +/- SD values expressed in OD units were: 0.525 +/- 0.304; 0.968 +/- 0.482 and 0.928 +/- 0.447, for breast cancer, benign disease and normal samples, respectively, p < 0.05. Lewis y/IgG/CIC did not show any statistically significant difference. MUC1/IgM/CIC correlated with Lewis y/IgM/CIC. By CASA, 9 samples with MUC1 values above the cut off were selected and IP was performed, followed by SDS-PAGE and Western blot; bands at 200 kDa were obtained with each MAb in all the samples. By IHC, with C14 MAb, 47.5%, 31% and 35% of malignant, benign and normal samples, respectively, showed positive reaction while all the samples were positive with anti-MUC1 MAb; in both cases, with a different pattern of expression between malignant and non malignant samples. Our findings support that in breast cancer there was a limited humoral immune response through Lewis y/IgM/CIC levels detection which correlated with MUC1/IgM/CIC. We also found that Lewis y might be part of circulating MUC1 glycoform structure and also that Lewis y/CIC did not correlate with Lewis y expression.
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    Rhomboid domain containing 2 (RHBDD2): A novel cancer-related gene over-expressed in breast cancer
    (2009) Abba, Martín Carlos; Lacunza, Ezequiel; Nunez, M. I.; Colussi, Andrea G.; Isla Larrain, Marina Teresita; Segal Eiras, Amada; Croce, María Virginia; Aldaz, C. Marcelo
    In the course of breast cancer global gene expression studies, we identified an uncharacterized gene known as RHBDD2 (Rhomboid domain containing 2) to be markedly over-expressed in primary tumors from patients with recurrent disease. In this study, we identified RHBDD2 mRNA and protein expression significantly elevated in breast carcinomas compared with normal breast samples as analyzed by SAGE (n=46) and immunohistochemistry (n=213). Interestingly, specimens displaying RHBDD2 over-expression were predominantly advanced stage III breast carcinomas (p=0.001). Western-blot, RT-PCR and cDNA sequencing analyses allowed us to identify two RHBDD2 alternatively spliced mRNA isoforms expressed in breast cancer cell lines. We further investigated the occurrence and frequency of gene amplification and over-expression affecting RHBDD2 in 131 breast samples. RHBDD2 gene amplification was detected in 21% of 98 invasive breast carcinomas analyzed. However, no RHBDD2 amplification was detected in normal breast tissues (n=17) or breast benign lesions (n=16) (p=0.014). Interestingly, siRNA mediated silencing of RHBDD2 expression results in a decrease of MCF7 breast cancer cells proliferation compared with the corresponding controls (p=0.001). In addition, analysis of publicly available gene expression data showed a strong association between high RHBDD2 expression and decreased overall survival (p=0.0023), relapsefree survival (p= 0.0013), and metastasis-free interval (p=0.006) in patients with primary ERnegative breast carcinomas. In conclusion, our findings suggest that RHBDD2 over-expression behaves as an indicator of poor prognosis and may play a role facilitating breast cancer progression.
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    Breast Cancer Biomarker Discovery in the Functional Genomic Age: A Systematic Review of 42 Gene Expression Signatures
    (2010) Abba, Martín Carlos; Lacunza, Ezequiel; Butti, Matías; Aldaz, C. Marcelo
    In this review we provide a systematic analysis of transcriptomic signatures derived from 42 breast cancer gene expression studies, in an effort to identify the most relevant breast cancer biomarkers using a meta-analysis method. Meta-data revealed a set of 117 genes that were the most commonly affected ranging from 12% to 36% of overlap among breast cancer gene expression studies. Data mining analysis of transcripts and protein-protein interactions of these commonly modulated genes indicate three functional modules significantly affected among signatures, one module related with the response to steroid hormone stimulus, and two modules related to the cell cycle. Analysis of a publicly available gene expression data showed that the obtained meta-signature is capable of predicting overall survival (P < 0.0001) and relapse-free survival (P < 0.0001) in patients with early-stage breast carcinomas. In addition, the identified meta-signature improves breast cancer patient stratification independently of traditional prognostic factors in a multivariate Cox proportional-hazards analysis.
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2010-2011)
    (2011) Rabassa, Martín Enrique
    Durante este período se analizó la presencia de nanovesículas derivadas de tumores presentes en el plasma de pacientes portadores de cáncer. Se estudió la presencia de exosomas, una variedad de nanovesícula de 40 a 100 nm de diámetro procedente del sistema endosomal, las cuales se acumulan en la circulación periférica de pacientes con cáncer. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. De un total de 41 pacientes con cáncer de mama estudiadas 27/41 (67%) presentaron valores elevados de proteínas en las fracciones correspondientes y 17 de estas 27 (63%) fracciones mostraron marcadores de exosomas y vesículas compatibles en las imágenes de microscopía electrónica. Se analizó la presencia en los exosomas de la mucina humana MUC1, ya que la misma había sido detectada por Staubach S y colegas (2009) en exosomas derivados de la línea de células tumorales de mama MCF7. Mediante el empleo del anticuerpo HMFG1 sólo fue posible determinar la presencia de MUC1 en una sola de las muestras. Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. La presencia de IDO en fracciones de exosomas fue confirmada en 4/12 pacientes con cáncer de mama y su expresión en estas vesículas podría constituir un mecanismo de inmunoevasión tumoral a distancia. Durante este período se inició la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello (Exp 800-8421/11 UNLP) en colaboración con el Dr Martín Abba. Las proteínas romboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. El presente trabajo se encuentra orientado a estudiar la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello y su relación con los parámetros anatomoclínicos de los pacientes. Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico. Otras investigaciones iniciadas en el período anterior se encuentran en desarrollo. En colaboración con el Doctor Miguel Pasquale del INIFTA se estableció un modelo de estudio de isquemia in vitro (coverslip hypoxia) orientado a estudiar el efecto de la misma sobre la expresión de MUC1 y la producción de exosomas en líneas celulares.
  • Informe de investigador
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    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2012)
    (2012) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama es una enfermedad de alta incidencia y mortalidad en nuestra provincia y en nuestro país, a pesar de los avances terapéuticos. La detección temprana del cáncer de mama es esencial para lograr eficacia en los tratamientos, y sumamente necesario el hallazgo de nuevas estrategias terapéuticas para aquellos subtipos de la enfermedad que no responden a los tratamientos existentes. Con el fin de contribuir con la prevención, detección precoz de los tumores primarios o de casos de recurrencia y/o metástasis como así también con la búsqueda de nuevas terapias, es necesario seguir ahondando en el conocimiento del comportamiento tumoral y de la respuesta inmune de las pacientes. En este sentido, es necesario profundizar en la búsqueda de nuevos biomarcadores útiles en pacientes con cáncer de mama como así también en mujeres con patologías benignas. Con este fin, se llevó a cabo un trabajo tendiente al estudio de la respuesta inmune humoral por medio de una adaptación de las técnicas de inmunohistoquímica e inmunocitoquímica. Se enfrentaron sueros de pacientes con líneas celulares de cáncer de mama y con tejidos tumorales de las mismas pacientes.
  • Informe de investigador
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2012)
    (2012) Rabassa, Martín Enrique
    Durante el período correspondiente al año 2012 se estudió la presencia de exosomas en el plasma de pacientes con tumroes de cáncer de mama y a partir del medio condicionado de líneas celulares. Los exosomas son pequeñas vesículas de menos de 100 nm de diámetro que son liberadas desde el compartimento endosomal de diversas células y en particular por las células tumorales. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. Se analizó la presencia en los exosomas de la lectina humana GAL1 mediante el empleo del anticuerpo policlonal de conejo y fue posible determinar la presencia de GAL1 en el 32% de las muestras y en las líneas tumorales humanas MCF7 y T47D y en las murinas B16 y 4T1 (Trabajo en preparación en colaboracion conel Dr G Rabinovich, CONICET). Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. Empleando Western blot se hallaron 4/11 muestras positivas. (Trabajo en preparación en colaboración con la Dra Isla Larrain, CIC-PBA) Se analizó la expresión nuclear de la mucina humana MUC1 en tumores de cabeza y cuello, colon y mama mediante inmunohistoquímica y Western blot. En particular se estudió la presencia de la porción extracelular, la cual a sido recientemente asociada con las motas nucleares. (Trabajo terminado, aun no enviado para su publicación) Durante este período se continuó la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello en colaboración con el Dr Martín Abba (CONICET) Las proeteínas rhomboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. En el presente trabajo se estudió la expresión de la proteína RHBDD2 en 124 pacientes con tumores de cabeza y cuello. El manuscrito se encuentra en preparación. En relación con el mismo tema pero en líneas de cáncer de colon se analizó la expresión de RHBDD2 a nivel de microcopía electrónica (Trabajo publicado) Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP-CONICET, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico
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    Glycerol-3-phosphate acyltransferase-2 is expressed in spermatic germ cells and incorporates arachidonic acid into triacylglycerols
    (2012) Cattaneo, Elizabeth; Pellón Maisón, Magalí; Lacunza, Ezequiel; Coleman, Rosalind A.; González Baró, María del Rosario; Rabassa, Martín Enrique
    Background: De novo glycerolipid synthesis begins with the acylation of glycerol-3 phosphate catalyzed by glycerol-3-phosphate acyltransferase (GPAT). In mammals, at least four GPAT isoforms have been described, differing in their cell and tissue locations and sensitivity to sulfhydryl reagents. In this work we show that mitochondrial GPAT2 overexpression in CHO-K1 cells increased TAG content and both GPAT and AGPAT activities 2-fold with arachidonoyl-CoA as a substrate, indicating specificity for this fatty acid. Methods and Results: Incubation of GPAT2-transfected CHO-K1 cells with [1-14C]arachidonate for 3 h increased incorporation of [14C]arachidonate into TAG by 40%. Consistently, arachidonic acid was present in the TAG fraction of cells that overexpressed GPAT2, but not in control cells, corroborating GPAT2's role in synthesizing TAG that is rich in arachidonic acid. In rat and mouse testis, Gpat2 mRNA was expressed only in primary spermatocytes; the protein was also detected in late stages of spermatogenesis. During rat sexual maturation, both the testicular TAG content and the arachidonic acid content in the TAG fraction peaked at 30 d, matching the highest expression of Gpat2 mRNA and protein. Conclusions: These results strongly suggest that GPAT2 expression is linked to arachidonoyl-CoA incorporation into TAG in spermatogenic germ cells.
  • Informe de investigador
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2013)
    (2013) Rabassa, Martín Enrique
    En este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de distintas localizaciones. Se analizó la mucina MUC1 y proteínas del grupo Rhomboide. Los ensayos estuvieron orientados a analizar la presencia de la porción extracelular de MUC1 en el núcleo celular. La mucina MUC1 consta de dos dominios, uno pequeño anclado a la membrana plasmática, el cual posee una porción intracelular relacionado con el control de señales intracelulares y otro mayor, unido de forma no covalente al menor y ubicado en el exterior celular. Esta porción se encuentra ampliamente glicosilada y se relaciona con la defensa de la célula epitelial frente a noxas o patógenos. El dominio menor puede observarse en diversas localizaciones subcelulares tales como la mitocondria o el núcleo celular. Allí interviene en la regulación de otros procesos de señales celulares, así como también la regulación de la expresión de genes. En trabajos previos de nuestro Centro habían detectado la presencia del dominio extracelular de MUC1 (MUC1-N) en el núcleo de la célula tumoral. Sin embargo, este fenómeno no había sido evaluado exhaustivamente en una serie de pacientes portadores de tumores. Con tal fin se analizó la detección de la porción extracelular de la mucina MUC1 en fracciones enriquecidas en núcleos de líneas celulares tumorales y en cortes de tumores de cabeza y cuello, colon y mama. Se observó que un porcentaje significativo de tumores de mama presentan esta localización particular de MUC1 mientras que en los tumores de cabeza y cuello y colon es un evento infrecuente. También se observó que es posible su aislamiento a partir de varias líneas celulares de cáncer de mama. (Rabassa et al, International Journal of Biological Markers, 2015) Por otra parte, se analizaron proteínas del grupo rhomboide con el objetivo de determinar la presencia de sus mRNA en exosomas del plasma de pacientes portadoras de cáncer de mama. La expresión del mRNA de algunas proteínas rhomboides se encuentran asociadas con el desarrollo de metastasis y la respuesta a drogas antineoplásicas. Su función específica no se conoce, aunque estudios recientes han observado que se localizan en el Aaparato de Golgi. A partir de las vesículas se extrajo mRNA el cual fue aislado y retrotranscripto a cDNA. A continuación se procedió a la evaluación de la expresión de diversos mRNA empleando rtPCR y sondas dirigidas contra actina y las proteínas RHBDD1, RHBDD2 y RHBDD3. Para este estudio se utilizó un pool de muestras de estadío I versus otro pool de muestras de estadios II y III de cáncer de mama. Los hallazgos muestran que no es posible detectar mRNA de RHBDD3 en exosomas circulantes de pacientes con cáncer de mama en ninguno de sus estadios mientras que RHBDD2 fue detectado en ambos pooles. Finalmente RHBDD1 sólo fue observado en las muestras en estadíos II y III lo que permite sospechar alguna relación con el proceso de desarrollo tumoral y lo cual se procederá a evaluar inmediatamente en mayor detalle. (trabajo en preparación).
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    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2013)
    (2013) Isla Larrain, Marina Teresita
    El estudio de los mecanismos involucrados en el desarrollo del cáncer de mama sigue siendo objeto de numerosas investigaciones a pesar del avance en las estrategias terapéuticas disponibles. Existen diferentes subtipos de la enfermedad caracterizados por diferentes biomarcadores presentes en los tumores tales como los receptores de estrógenos, de progesterona y HER2 neu. Estos subtipos determinados por detección de estos receptores proteicos se asocian con una clasificación por técnicas de biología molecular que los clasifica en: Luminal A, Luminal B, HER 2 neu enriquecido, basal y normal-like. En ciertos subtipos, no se disponen de terapéuticas óptimas para el tratamiento, tal es el caso de los tumores triple negativos, o bien no son eficaces los tratamientos disponibles. De ahí la importancia de ahondar en el conocimiento de la biología tumoral para producir avances en este sentido ya que el cáncer de mama presenta una alta incidencia y tasa de mortalidad en nuestro país y en nuestra provincia. Con el fin de contribuir con la prevención, detección precoz de los tumores primarios o de casos de recurrencia y/o metástasis como así también con la búsqueda de nuevas terapias, es necesario abordar también aspectos relacionados con la respuesta inmune de las pacientes tales como la tolerancia inmunológica y los mecanismos de escape de los que se vale el tumor para evadir al sistema inmune del huésped.
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    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Croce, María Virginia (2012-2014)
    (2014) Croce, María Virginia
    La diseminación tumoral constituye un complejo proceso que comprende la invasión y la metástasis o diseminación a distancia. Esta secuencia se debe a múltiples factores que incluyen marcadores tumorales del proceso, los que podrían tener utilidad clínica para el seguimiento de los pacientes con cáncer. Durante el período informado se realizó un estudio comparado de la expresión de un conjunto de antígenos asociados a cáncer de mama en tumores primarios, metástatasis cutáneas y ganglios axilares comprometidos de la misma paciente. Se trató de establecer la existencia de una expresión diferencial de los antígenos asociados en los tres tipos de muestras analizadas. Es un tema de especial interés el determinar los factores implicados en la diseminación tumoral a determinados órganos. En el análisis que realizamos durante este período se incluyeron los ganglios y las metástasis en piel. El cáncer de mama es el tumor primario sólido que con más frecuencia da esta localización metastásica y no se conocen los mecanismos que están implicados en esta diseminación.
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    Acceso Abierto
    The head and neck cancer cell oncogenome: a platform for the development of precision molecular therapies
    (Impact Journals, 2014) Martin, Daniel; Abba, Martín Carlos; Molinolo, Alfredo A.; Vitale-Cross, Lynn; Wang, Zhiyong; Zaida, Moraima; Delic, Naomi C.; Samuels, Yardena; Lyons, J. Guy; Gutkind, J. Silvio
    The recent elucidation of the genomic landscape of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) has provided a unique opportunity to develop selective cancer treatment options. These efforts will require the establishment of relevant HNSCC models for preclinical testing. Here, we performed full exome and transcriptome sequencing of a large panel of HNSCC-derived cells from different anatomical locations and human papillomavirus (HPV) infection status. These cells exhibit typical mutations in TP53, FAT1, CDK2NA, CASP8, and NOTCH1, and copy number variations (CNVs) and mutations in PIK3CA, HRAS, and PTEN that reflect the widespread activation of the PI3K-mTOR pathway. SMAD4 alterations were observed that may explain the decreased tumor suppressive effect of TGF-β in HNSCC. Surprisingly, we identified HPV+ HNSCC cells harboring TP53 mutations, and documented aberrant TP53 expression in a subset of HPV+ HNSCC cases. This analysis also revealed that most HNSCC cells harbor multiple mutations and CNVs in epigenetic modifiers (e.g., EP300, CREBP, MLL1, MLL2, MLL3, KDM6A, and KDM6B) that may contribute to HNSCC initiation and progression. These genetically-defined experimental HNSCC cellular systems, together with the identification of novel actionable molecular targets, may now facilitate the pre-clinical evaluation of emerging therapeutic agents in tumors exhibiting each precise genomic alteration.
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    Protein kinase C and cancer: what we know and what we do not
    (2014) Garg, Rachana; Benedetti, Lorena G.; Abera, Mahlet B.; Wang, HongBin; Abba, Martín Carlos; Kazanietz, Marcelo G.
    Since their discovery in the late 1970’s, protein kinase C (PKC) isozymes represent one of the most extensively studied signaling kinases. PKCs signal through multiple pathways and control the expression of genes relevant for cell cycle progression, tumorigenesis and metastatic dissemination. Despite the vast amount of information concerning the mechanisms that control PKC activation and function in cellular models, the relevance of individual PKC isozymes in the progression of human cancer is still a matter of controversy. Although the expression of PKC isozymes is altered in multiple cancer types, the causal relationship between such changes and the initiation and progression of the disease remains poorly defined. Animal models developed in the last years helped to better understand the involvement of individual PKCs in various cancer types and in the context of specific oncogenic alterations. Unraveling the enormous complexity in the mechanisms by which PKC isozymes impact on tumorigenesis and metastasis is key for reassessing their potential as pharmacological targets for cancer treatment.
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    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2015)
    (2015) Rabassa, Martín Enrique
    En este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de cabeza y cuello y en otras localizaciones como tumores de mama y tumores de colon. Principalmente se analizó la expresión de antígenos glusídicos del grupo Lewis (lewis x y sialil Lewis x , moléculas que se hallan relacionadas con la progresión tumoral y la diseminación metastásica) y la mucina humana MUC1. Por otra parte se iniciaron las tareas de investigación referidas al aislamiento y caracterización de microvesiculas y exosomas de plasma humano obtenidas de pacientes portadoras de cáncer de mama.
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    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2014-2015)
    (2015) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama constituye una problemática de gran importancia para nuestra provincia y nuestro país por la alta tasa de incidencia que presenta esta enfermedad. Se está estudiando la expresión de IDO y Foxp3 en cortes de tumores primarios de cáncer de mama y serán cuantificados en linfocitos de sangre periférica. Por otra parte, se está analizando el infiltrado linfocitario con marcadores específicos (CD4, CD8, CD45RO y Foxp3). El subtipo molecular del tumor se establece mediante la determinación de marcadores específicos tales como Receptor de estrógenos, Receptor de progesterona, Her-2-neu y citoqueratinas basales. Por otro lado se busca relacionar el tipo de infiltrado linfocitario y la expresión de IDO, Foxp3 y mucinas con el subtipo tumoral, estadío, grado de diferenciación histológica, grado nuclear y sobrevida. También se pretende establecer las posibles asociaciones entre estos parámetros inmunológicos. Las biomoléculas asociadas a subtipos tumorales pueden servir como blanco terapéutico para impedir la proliferación de las células tumorales o bien, exacerbar la respuesta inmune dirigida hacia ellos.
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    A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ
    (AACR Publications, 2015) Abba, Martín Carlos; Gong,Ting; Lu, Yue; Lee, Jaeho; Zhong, Yi; Lacunza, Ezequiel; Butti, Matías; Takata, Yoko; Gaddis, Sally; Shen, Jianjun; Estecio, Marcos R.; Sahin, Aysegul A.; Aldaz, C. Marcelo
    Ductal carcinoma in situ (DCIS) is a noninvasive precursor lesion to invasive breast carcinoma. We still have no understanding on why only some DCIS lesions evolve to invasive cancer whereas others appear not to do so during the life span of the patient. Here, we performed full exome (tumor vs. matching normal), transcriptome, and methylome analysis of 30 pure high-grade DCIS (HG-DCIS) and 10 normal breast epithelial samples. Sixty-two percent of HG-DCIS cases displayed mutations affecting cancer driver genes or potential drivers. Mutations were observed affecting PIK3CA (21% of cases), TP53 (17%), GATA3 (7%), MLL3 (7%) and single cases of mutations affecting CDH1, MAP2K4, TBX3, NF1, ATM, and ARID1A. Significantly, 83% of lesions displayed numerous large chromosomal copy number alterations, suggesting they might precede selection of cancer driver mutations. Integrated pathway-based modeling analysis of RNA-seq data allowed us to identify two DCIS subgroups (DCIS-C1 and DCIS-C2) based on their tumor-intrinsic subtypes, proliferative, immune scores, and in the activity of specific signaling pathways. The more aggressive DCIS-C1 (highly proliferative, basal-like, or ERBB2+) displayed signatures characteristic of activated Treg cells (CD4+/CD25+/FOXP3+) and CTLA4+/CD86+ complexes indicative of a tumor-associated immunosuppressive phenotype. Strikingly, all lesions showed evidence of TP53 pathway inactivation. Similarly, ncRNA and methylation profiles reproduce changes observed postinvasion. Among the most significant findings, we observed upregulation of lncRNA HOTAIR in DCIS-C1 lesions and hypermethylation of HOXA5 and SOX genes. We conclude that most HG-DCIS lesions, in spite of representing a preinvasive stage of tumor progression, displayed molecular profiles indistinguishable from invasive breast cancer.
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Croce, María Virginia (2014-2016)
    (2016) Croce, María Virginia
    El proceso de metástasis está regulado por el “cross-talk” entre las células neoplásicas y las del microambiente tumoral. Durante este período analizamos la identidad antigénica de las células neoplásicas en los tumores primarios y metástasis hallando diferentes subpoblaciones de células neoplásicas metastásicas que expresan MUC1, antígenos Lewis y romboides 2 justificando, al menos en parte, los posibles mecanismos de escape tumoral en relación al pronóstico de los pacientes. Se determinó la traslocación al núcleo de células neoplásicas de la fracción extramembranosa de MUC1, lo que sumaría otra vía de regulación de esta mucina a la diseminación. Asimismo, realizamos el análisis de la indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), molécula inmunosupresora, hallándola expresada por las células tumorales y demostrándose la asociación del gen de IDO con otros genes relacionados con la respuesta inmune y apoptosis. Se continuó con el estudio poblacional de factores de riesgo, incidencia y prevención del cáncer de mama y el desarrollo de modelos experimentales.
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    Acceso Abierto
    Characterization of a P-Rex1 gene signature in breast cancer cells
    (Impact Journals, 2016) Barrio Real, Laura; Wertheimer, Eva; Garg, Rachana; Abba, Martín Carlos; Kazanietz, Marcelo G.
    The Rac nucleotide Exchange Factor (Rac-GEF) P-Rex1 is highly expressed in breast cancer, specifically in the luminal subtype, and is an essential mediator of actin cytoskeleton reorganization and cell migratory responses induced by stimulation of ErbB and other tyrosine-kinase receptors. Heregulin (HRG), a growth factor highly expressed in mammary tumors, causes the activation of P-Rex1 and Rac1 in breast cancer cells via ErbB3, leading to a motile response. Since there is limited information about P-Rex1 downstream effectors, we carried out a microarray analysis to identify genes regulated by this Rac-GEF after stimulation of ErbB3 with HRG. In T-47D breast cancer cells, HRG treatment caused major changes in gene expression, including genes associated with motility, adhesion, invasiveness and metastasis. Silencing P-Rex1 expression from T-47D cells using RNAi altered the induction and repression of a subset of HRG-regulated genes, among them genes associated with extracellular matrix organization, migration, and chemotaxis. HRG induction of MMP10 (matrix metalloproteinase 10) was found to be highly sensitive both to P-Rex1 depletion and inhibition of Rac1 function by the GTPase Activating Protein (GAP) β2-chimaerin, suggesting the dependence of the P-Rex1/Rac1 pathway for the induction of genes critical for breast cancer invasiveness. Notably, there is a significant association in the expression of P-Rex1 and MMP10 in human luminal breast cancer, and their coexpression is indicative of poor prognosis. Brecha entre expectativas y percepciones de los empleadores: Un aspecto importante a tener en cuenta al analizar la brecha fue considerar no sólo la evaluación actual sino también la expectativa sobre el atributo bajo análisis. En tal sentido, una brecha amplía podría deberse tanto a una buena evaluación como a una baja expectativa. Los resultados expuestos revelaron, en concordancia con el análisis respecto de la satisfacción general de los empleadores con los graduados de la Licenciatura en Economía, que la totalidad de las brechas analizadas están dentro de la zona de satisfacción. Las brechas de las variables con mayor expectativa sobre las competencias de los graduados referidas a cada uno de los grupos definidos, es decir, la capacidad para la identificación de problemas y encontrar la solución, la capacidad para acceder, evaluar y sintetizar información y la capacidad para pensar crítica, creativa y reflexivamente si bien no alcanzan el nivel de satisfacción total, cumplen con las expectativas de los empleadores. Adicionalmente, las brechas de las variables en las cuales los empleadores se han mostrado algo más que satisfechos fueron aquellas en las que las expectativas no eran demasiado altas al momento de realizar la encuesta.
  • Artículo
    Acceso Abierto
    DMBA induced mouse mammary tumors display high incidence of activating Pik3caH1047 and loss of function Pten mutations
    (Impact Journals, 2016) Abba, Martín Carlos; Zhong, Yi; Lee, Jaeho; Kil, Hyunsuk; Lu, Yue; Takata, Yoko; Simper, Melissa S.; Gaddis, Sally; Shen, Jianjun; Aldaz, C. Marcelo
    Controversy always existed on the utility of chemically induced mouse mammary carcinogenesis models as valid equivalents for the study of human breast cancer. Here, we performed whole exome and RNA sequencing on long latency mammary tumors (218 ± 27 days) induced by the carcinogen 7,12-Dimethylbenzathracene (DMBA) and short latency tumors (65 ± 11 days) induced by the progestin Medroxyprogesterone Acetate (MPA) plus DMBA in CD2F1 mice. Long latency tumors displayed a high frequency of Pi3kca and/or Pten mutations detected in 11 of 13 (85%) long latency cases (14/22, 64% overall). Eighty-two percent (9/11) of tumors carried the Pik3ca H1047L/R hot-spot mutation, as frequently found in human breast cancer. These tumors were luminal-like and mostly ER/PR+, as in humans. Transcriptome profiling indicated a significant activation of the PI3K-Akt pathway (p=3.82e-6). On the other hand MPA+DMBA induced short latency tumors displayed mutations in cancer drivers not commonly found mutated in human breast cancer (e.g. Hras and Apc). These tumors were mostly basal-like and MPA exposure led to Rankl overexpression (60 fold induction) and immunosuppressive gene expression signatures. In summary, long latency DMBA induced mouse mammary tumors reproduce the molecular profile of human luminal breast carcinomas representing an excellent preclinical model for the testing of PIK3CA/Akt/mTOR pathway inhibitory therapies and a good platform for the developing of additional preclinical tools such as syngeneic transplants in immunocompetent hosts.
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2016-2017)
    (2017) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama constituye una problemática de gran importancia para nuestra provincia y nuestro país por la alta tasa de incidencia que presenta esta enfermedad. Su evolución depende del balance entre la heterogenidad que caracteriza a estos tumores y la respuesta inmune del huésped. El escape tumoral a la inmunovigilancia se está estudiando a través de la expresión de IDO e infiltrados linfocitarios mediante marcadores específicos (CD4, CD8, CD45RO y Foxp3) en tumores primarios de cáncer de mama. También se están estudiando los niveles de linfocitos T regulatorios en sangre periférica y exosomas circulantes que presentan evidencia de actividad inmunosupresora para favorecer la diseminacíón y metástasis. El subtipo molecular del tumor se establece mediante la determinación de receptores: receptor de estrógenos, progesterona y Her2neu. Por otro lado, se busca relacionar el tipo de infiltrado linfocitario y la expresión de parámetros inmunológicos con las características tumorales. Las moléculas inmunomoduladoras asociadas a los tumores podrían servir como nuevos blancos terapéuticos para complementar las terapias convencionales.