Informe Científico de Investigador

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  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Estrella, María Julia (2013-2014)
    (2014) Estrella, María Julia
    En el tema de trabajo "Simbiosis rizobio-leguminosa. Factores involucrados en su establecimiento y desarrollo bajo diversas condiciones ambientales", se continuó con el estudio de los mecanismos involucrados en la tolerancia a estreses abióticos de los rizobios simbiontes de L. tenuis tolerantes a salinidad y/o alcalinidad. En este estudio se continuó con la caracterización de mutantes de rizobios tolerantes a NaCl, obtenidas por mutagénesis al azar, mediante conjugación con una cepa de E. coli portadora de un transposón miniTn5. En el tema "Aspectos biotecnológicos aplicados a bacterias solubilizadoras de fosfato para incrementar la productividad de suelos agrícola-ganaderos de la Pampa Deprimida del Salado" se seleccionó la cepa P eucalypti M91 (procedente de una colección de aislamientos del laboratorio, previamente caracterizados (Castagno et al., 2011) para realizar ensayos de inoculación de L. tenuis a campo, en presencia de distintas fuentes de fósforo (roca fosfática, superfosfato triple, sin fosfato). En el tema "Variabilidad genética entre rizobios simbiontes de L. tenuis mediada por la transferencia horizontal de una isla simbiótica", uno de los primeros objetivos propuestos apunta a determinar la presencia de la isla en una colección de simbiontes de L. tenuis , aislados de suelos de la Pampa Deprimida del Salado. Para ello se utilizaron cebadores específicos que permitieran amplificar por PCR un fragmento del extremo de la isla (P4-like integrase) y la región adyacente al mismo, donde se integra esta isla generalmente (Phe-tRNA). También se realizaron amplificaciones de genes nodC y nifH. Estos productos de PCR se enviaron a secuenciar y actualmente siendo analizados.
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Estrella, María Julia (2011-2012)
    (2012) Estrella, María Julia
    Uno de los planes de trabajo propuestos contempla el estudio de los mecanismos involucrados en la tolerancia a estreses abióticos de los rizobios simbiontes de L. tenuis tolerantes a salinidad y/o alcalinidad. Para ello, se realizaron experimentos de mutagénesis al azar de cepas de rizobios tolerantes o sensibles a NaCl y/o alcalinidad, mediante conjugación con una cepa de E. coli portadora de un transposón Tn5. Las cepas de rizobios utilizadas, forman parte de una colección de rizobios aislados de la Pampa Deprimida del Salado y caracterizados a nivel de género y especie por técnicas moleculares de identificación taxonómica (Estrella et al., 2009) y se seleccionaron luego de realizar ensayos de tolerancia a salinidad y/ o alcalinidad en condiciones controladas de laboratorio tanto en vida libre como en simbiosis con L. tenuis (informe 2010). Luego de realizar los ensayos de conjugación con la cepa tolerante, se evaluó el crecimiento de 6000 clones transposantes, en condiciones control, de salinidad (NaCl 400 mM) y alcalinidad (pH11). Del total de clones analizados, se obtuvieron 8 cuyo crecimiento se afectó en condiciones de salinidad. Se realizaron perfiles Box-PCR a partir de ADN genómico de la cepa tolerante (wt) y de los clones transposantes sensibles a salinidad para confirmar que las mismas derivan de la cepa wt y descartar la presencia de colonias sensibles a salinidad originadas por contaminaciones. Se realizaron ensayos de PCR con cebadores específicos para el miniTn5, con el objetivo de confirmar que dichos clones contienen una inserción del miniTn5 y que efectivamente son mutantes. Por otra parte, se realizaron ensayos de mutagénesis al azar con cepas sensibles, con el objetivo de obtener cepas tolerantes a salinidad y/o alcalinidad, mediante la inserción del transposón en algún gen regulador que pueda estar afectando negativamente la tolerancia a dichos estreses. En este caso no se logró obtener clones transposantes tolerantes a ninguna de las condiciones antes mencionadas. El otro tema propuesto abarca el estudio y evaluación del efecto promotor del crecimiento vegetal, de cepas solubilizadoras de fosfato mineral, aisladas de la rizosfera de L. tenuis. Luego de caracterizar una colección de aislamientos (Castagno et al., 2011) se seleccionó una cepa de dicha colección para realizar ensayos de inoculación de L. tenuis a campo, en presencia de distintas fuentes de fósforo (roca fosfática, superfosfato triple, sin fosfato). Se observó un incremento en la producción de biomasa de 41% en plantas inoculadas respecto de las no inoculadas. Además se realizó el trazado de la bacteria inoculante mediante la técnica de huella digital BOX-PCR, para confirmar la presencia de la cepa en el interior de las plantas inoculadas, dado que en condiciones de laboratorio se había observado que dicha bacteria se comportaba como endofito y era capaz de colonizar raíz y hojas de L. tenuis. Los resultados de dicho estudio se presentaron en el congreso latinoamericano de rizobiología en septiembre del 2011 en la ciudad de Piriápolis, Uruguay y actualmente se está escribiendo un manuscrito para su publicación. Por otra parte, en el marco del proyecto PICT start-up, se realizaron evaluaciones del ensayo de inoculantes realizado en la Chacra Experimental Integrada Chascomus, Ministerio de Asuntos Agrarios, INTA junto con la empresa Biagro SA, durante el transcurso del año 2011.