Informe de investigador
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Informe científico de investigador: Maté, Sabina María (2013)

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Resumen

1- El objetivo general del proyecto de investigación en el que participo consiste en profundizar el conocimiento concerniente al mecanismo de acción de la toxina proteica alfa-hemolisina (HlyA), secretada por ciertas cepas patógenas de Escherichia coli. En relación con dicha linea se encuentra el estudio de la Validación de métodos de estudio de membrane rafts. Durante el periodo que informo en esta oportunidad (año 2013) se realizaron experimentos, revisión de resultados, re-redaccion de los trabajos, etc requeridos por los referees para la publicación de dos papers, en los que se estudió: a) la influencia de la composición y propiedades de membranas (segregación de fases) en la inserción de la toxina HlyA. Para ello se realizaron experimentos en sistemas modelo de membrana, empleado la técnica de monocapas y microscopía de fuerza atómica, en bicapas soportadas sobre mica. En ese trabajo se visualizó por primera vez, en tiempo real, la interacción de HlyA con membranas; se determinó que la toxina se inserta preferencialmente en fases liquido-desordenadas (ld), donde el empaquetamiento lipídico es menor, en comparación con fases liquido-ordenadas (lo). En este trabajo se muestra entonces que una proteína acilada, que se ha visto asociada a DRM, se inserta preferencialmente en fases ld, contribuyendo al esclarecimiento de una cuestion controvertida, referente a la interacción de este tipo de proteínas con membranas. El paper correspondiente ("Escherichia coli alpha-hemolysin, an acylated protein: preferential insertion into liquid-disordered domains of membranes—a Real-time study") fué enviado para su publicación a la revista BBActa y, al mes de Diciembre de 2013, se encontraba en segunda ronda de revisión. b) el rol del Cho en el mecanismo de acción lítico de la toxina en estudio. Se encontró, mediante estudios de lipid dot blot y surface plasmon resonance (SPR) que la interacción directa entre HlyA y el Cho induce un cambio conformacional en la toxina que facilita su inserción en la membrana. El paper correspondiente (“The novel evidence of the specific interaction between cholesterol and a RTX toxin”) fué enviado para su publicación a la revista Biochemical Journal y, al mes de Diciembre de 2013, se encontraba en prensa. Además, durante el año 2013 y a partir del intercambio con el Dr. Felix Goñi (de la Universidad del Pais Vasco), se realizaron algunos experimentos y se redactó la versión final de un trabajo titulado "N-nervonoylsphingomyelin (C24:1) prevents lateral heterogeneity in cholesterol-containing membranes”. En dicho trabajo se estudió la influencia de la estructura de la esfingomielina en la organización lateral de membranas biológicas. En el mismo se combinaron diferentes técnicas como Microscopia confocal, AFM -espectroscopia de fuerzas y espectrometría de masas. Finalmente, durante el período informado (año 2013) comencé a realizar trabajos en colaboración con la Dra. Mariana Farina del Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFyBO-UBA-CONICET), en el proyecto: “Efectos de la hipoxia en la fisiología placentaria. Participación del sistema endocannabinoide”. Actualmente contamos con un subsidio de Florentino Fiorini para su financiación. Mi participación en este proyecto tiene que ver con la participación de microdominios de membrana en las vías de transducción desencadenadas por los endocannabinoides.

Palabras clave
interacción esfingomielina-colesterol
membranas biológicas
toxina alpha-hemolisina de E. coli
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