Informe de becario

Informe científico de Beca de Estudio: Oyarburo, Natalia Soledad (2014)

Resumen

El objetivo general del estudio realizado en el transcurso de la presente beca fue evaluar la participación de compuestos relacionados con la vía del ácido salicílico (SA) en la respuesta de defensa inducida en papa por fosfitos (Phi) frente a estrés abióticos, en particular la radiación ultravioleta (UV-B). Durante este segundo año, se determinó la expresión de un gen marcador del estado del aparato fotosintético y de un gen marcador de la vía de señalización del ácido salicílico, y la determinación de la actividad de enzimas antioxidantes en plantas tratadas y no con Phi y expuestas o no a UV-B. Para llevar a cabo los objetivos, trabajamos con plantas de papa de variedad industrial, las cuales se trataron por spray foliar con una solución 1% fosfito de potasio (KPhi) 20 dias luego de la emergencia. Tres días después, se sometieron a radiación UV-B por 2hs diarias durante 0, 3, 5 y 6 días. Como control se utilizaron plantas que fueron sometidas solo a radiación UV-B, tratadas con KPhi solamente y que no recibieron tratamiento. Tal como se menciono en el pedido de prórroga, se observó una expresión diferencial de isoformas de Peroxidasas (POD, enzimas antioxidantes) relacionadas al tratamiento con radiación de UV-B o al tratamiento con KPhi. Para avanzar en la identificación de las mismas, se realizaron isoelectroenfoques, en primer lugar con un rango de pH amplio y luego con rangos de pH acotados a las zonas donde se vieron concentradas las bandas en el primer isoelectroenfoque. Se observó la inducción de isoformas de POD con pI=6,6, pI=7,2, pI=7,6 y pI=9,5 en todas las muestras analizadas, pero esta fue mayor en plantas tratadas con KPhi y expuestas a UV-B. Se repetirán estos ensayos acotando aun mas los rangos de pH y se obtendrán muestras para realizar una identificación por secuenciación de las mismas. En cuanto a la evaluación de parámetros fenotípicos relacionados con la tolerancia a la radiación UV-B en plantas tratadas con KPhi, se analizó la expresión del gen psbA mediante Real-time PCR. Este gen codifica para el polipéptido D1 del Fotosistema II, y se utiliza como marcador del estado de integridad del aparato fotosintético (Surplus et al., 1998). Para ello se realizó la extracción de RNA a partir de hojas de los distintos tratamientos con los cuales se realizó la síntesis de cDNA. Estos últimos se utilizaron como templados para las reacciones de Real-Time PCR utilizando primers específicos para dicho gen. Al igual que lo determinado para el Indice de verdor, se observó una disminución en la expresión del gen psbA debido al estrés por radiación UV-B con respecto a la condición control, la cual no se observa al realizar el tratamiento con KPhi y posterior exposición al estrés. Por último, mediante PCR semicuantitativa y Real-time PCR se determinó la expresión del gen PR1, el cual es utilizado como marcador de la vía de señalización del ácido salicílico. Se observó una inducción de la expresión de este gen por la radiación UV-B como se esperaba por bibliografía (Surplus et al., 1998) y una inducción aún mayor en plantas tratadas con KPhi y expuestas a UV-B. Por otra parte, se avanzó en la redacción de una publicación la cual esta próxima de ser enviada a una revista internacional la cual se encuentra adjuntada en el apartado 7.4. En este trabajo se encuentran resultados obtenidos durante el primer año de Beca de Estudio y algunos de los obtenidos durante este segundo año. Así mismo, participe en la redacción de una publicación con los resultados obtenidos durante la realización de la Tesis de Grado con la cual obtuve el título de Lic en Cs Biológicas, el cual también se encuentra adjunto en el apartado 7.4. Este trabajo no guarda relación con el tema de Tesis Doctoral propuesto y fue realizado bajo la dirección de la Dra Laura de la Canal y la Dra Luciana Pagnussat en el laboratorio de Biología Molecular perteneciente al mismo Instituto.

Palabras clave
Streptomyces
Ácido Salicílico
Rayos Ultravioleta
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