Informe de investigador
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Informe científico de investigador: Alippi, Adriana Mónica (2012-2013)

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Resumen

Objetivo general: Desarrollar alternativas biológicas no contaminantes para el control de loque americana mediante el empleo de cepas bacterianas antagónicas e investigar las bases genéticas de la resistencia a tetraciclina en las poblaciones de Paenibacillus larvae y otras especies de bacterias Gram (+) presentes en miel. Los principales resultados obtenidos durante el período informado se resumen a continuación: 6.1.Se determinó la presencia del determinante tetL en plásmidos mobilizables aislados decepas de P. larvae con alta resistencia a tetraciclina provenientes de EE.UU. Se obtuvieron las secuencias completas de los plásmidos pPL373, pPL374 y pPL395 provenientes de las cepas del patógeno rtesistentes a tetraciclina (Tc) y oxitetraciclina (OTC) pero sensibles a minociclina (Mn). Dichas secuencias se depositaron en el GenBank con los números de acceso KF 433938 para pPL373, KF 536616 para pPL374 y KF440690 para pPL395. Se demostró experimentalmente la transferencia del plásmido pPL374 en la cepa de B. subtilis m351 y del plásmido pPL373 en la cepa de B. subtilis GSY1104 mediante conjugaciones en medio líquido. Al examinar ambas cepas dadoras de P. larvae PL373 y PL374 mediante la técnica de lisis in situ se observaron dos plásmidos de aproximadamente 5.000 pb y 8.000 pb, pero sólo el plásmido más pequeño era el que contenía el gen de resistencia a Tc. Luego de efectuar la secuenciación completa de los dos plásmidos más pequeños obtenidos de las cepas pPL373 y pPL374 confirmamos que el gen de resistencia era el tetL y no el tetK como creímos en un principio y que ambos replican por el mecanismo de círculo rodante encontrado en pequeños plásmidos movilizables de alto número de copias presentes en bacterias Gram (+). Todos los experimentos de conjugación empleando la cepa PL395 conteniendo solamente el plásmido pPL395 de 5.000 bp resultaron infructuosos, no obstante el pPL395 si pudo transferirse por electroporación a una cepa de P. larvae TcS. Los plásmidos pPL373 y pPL374 también pudieron transferirse por electroporación a la misma cepa de P. larvae TcS. En todos los casos los plásmidos se mantuvieron en forma estable en sus respectivos aceptores. La presencia de plásmidos con secuencias muy similares aislados de bacterias Gram (+) provenientes de distintas zonas geográficas y de distintos nichos ecológicos (suelo, hábitats marinos, alimentos) de los géneros Bacillus, Paenibacillus, Sporosarcina, Lactobacillus y Bhargavaea sugieren que los genes mob presentes en dichos plásmidos están involucrados en una exitosa THG. El uso extensivo de Tc y OTC para el control de loque americana en algunos países de América pudo haber contribuido al incremento del número de cepas resistentes de P. larvae, favoreciendo la transferencia de estos plásmidos entre cepas del mismo patógeno o desde o hacia otras especies de bacterias Gram (+) de los géneros Lactobacillus, Bacillus y Paenibacillus que pertenecen a la microbiota de la colmena (miel, tractos digestivos de abejas adultas y larvas, superficies florales y polen). El uso prolongado de tetraciclina en las colmenas afectadas por loque americana y otras enfermedades bacterianas estaría favoreciendo la ocurrencia de eventos de transferencia genética horizontal como se demostró en cepas del patógeno provenientes de EE.UU.

Palabras clave
loque americana
cepas bacterianas antagónicas
miel
Ciencias Agrarias
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