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Proteasas de Bromeliaceae: V. Separación y purificación de sulfhidril - proteasas presentes en frutos de Bromelia balaasae Mez

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Resumen

Almost ripe fruits of Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae) were blade homogeneized within cold (-20 O C ) acetone, providing a crude preparation that could be partialiy solubllized in phosphate buffer (pH 6,4) containing EDTA and cysteine 5 mM. Solutions hydrolize casein (maximum a c t ~ t ypH 6.25-8.5O), the activity being enhanced by addition of cysteine. The crude enzyme was purified by molecular sieve chromatography (Sephadex G-75, Superfme) and ion exchange chromatography (DEAE- and CM-Sepharose). Three proteolitically active fractions were thus obtained

La trituración de frutos semimaduros de Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae) en presencia de acetona fría (-20 OC) permite obtener una preparación enzimática cruda, que al ser tratada con buffer fosfatos de pH 6,4 conteniendo EDTA y cisteína 5 mM produce una solución con actividad proteolítica apreciable y con máxima acción hidrolítica sobre caseína dentro de un rango de pH entre 6,25 y 8,50. Esta solución enzimática cruda se purificó por cromatografía de exclusión molecular (Sephadex G-75 Superfuio) y de intercambio iónico (DEAE- y CM-Sepharosa), con lo que se obtuvieron tres fracciones proteolíticamente activas.

Palabras clave
Enzimas
Hidrólisis
Solubilidad
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