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Proteasas de Bromeliaceae: V. Separación y purificación de sulfhidril - proteasas presentes en frutos de Bromelia balaasae Mez

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Resumen

Almost mature fruits of Bromelia serra Griseb., blade homogenized (Waring blender) with cold acetone (-20ºC), provide a light, proteolitically active acetone powder (1, 93g%, w/w). Extractives obtained by gentle stirring with phosphate buffer pH 6,4 containing 5 mM cysteine and 5 mM EDTA (protein content 8, 24 g per 100 g of powder) show good thermal stability at moderates temperatures and highest caseinolytic activity at pH 6.0-7.8. Gel- filtration (Sephadex G-75, Superfine) allows to separate one active fraction which is resolved in two new, more pursed fractions through ion-exchange chromatography (DEAE Sephacel and CM Sepharose).

Por trituración de frutos semimaduros de Brormlia serra Griseb. (Bromeliaceae) en presencia de acetona fría (-20ºC) se obtiene un polvo acetónico (1, 93g%, p/p) con actividad proteolítica. La extracción del mismo con buffer fosfatos de pH 6, 4 conteniendo EDTA 5 mM y cisteína 5 mM permite preparar una solución de enzima cruda con un contenido proteico de 8, 24 g por 100 g de polvo, dotada de buena estabilidad térmica a temperaturas moderadas y con un máximo de actividad caseinolítica a pH 6,0-7,8. Esta preparación cruda se purifica por cromatografía de exclusión molecular (Sephadex G-75 Superfine) y la fracción activa se resuelve en dos nuevas fracciones por cromatografía de intercambio iónico (DEAE Sephacel y CM Sepharose).

Palabras clave
Hidrolasas de péptidos
Enzimas
Cromatografía
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