Informe Científico de Investigador

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    Informe científico de investigador: Croce, María Virginia (2016-2018)
    (2018) Croce, María Virginia
    La diseminación tumoral ocurre por la invasión de los capilares venosos y linfáticos con una primera estación en los ganglios linfáticos y posteriormente en órganos distantes. Durante este período se estudió la expresión de moléculas de adhesión implicadas en la diseminación tumoral en tumores primarios y ganglios linfáticos de cáncer de mama y colorrectal. Se estudió la presencia de vasos sanguíneos y linfáticos de neoformación observándose la invasión de células tumorales. Se analizó la preparación de nichos metastásicos mediante la determinación de la enzima indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), molécula inmunomoduladora, en carcinomas mamarios primarios y ganglios linfáticos pareados y se estudió el perfil de células linfoides en los ganglios comprometidos. Asimismo, se analizó la expresión de antígenos asociados a MUC1 y su valor pronóstico en pacientes con tumores epiteliales malignos de cabeza y cuello. Se continuó con el estudio poblacional de factores de riesgo, incidencia y prevención del cáncer de mama y el desarrollo de modelos experimentales.
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    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2016-2017)
    (2017) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama constituye una problemática de gran importancia para nuestra provincia y nuestro país por la alta tasa de incidencia que presenta esta enfermedad. Su evolución depende del balance entre la heterogenidad que caracteriza a estos tumores y la respuesta inmune del huésped. El escape tumoral a la inmunovigilancia se está estudiando a través de la expresión de IDO e infiltrados linfocitarios mediante marcadores específicos (CD4, CD8, CD45RO y Foxp3) en tumores primarios de cáncer de mama. También se están estudiando los niveles de linfocitos T regulatorios en sangre periférica y exosomas circulantes que presentan evidencia de actividad inmunosupresora para favorecer la diseminacíón y metástasis. El subtipo molecular del tumor se establece mediante la determinación de receptores: receptor de estrógenos, progesterona y Her2neu. Por otro lado, se busca relacionar el tipo de infiltrado linfocitario y la expresión de parámetros inmunológicos con las características tumorales. Las moléculas inmunomoduladoras asociadas a los tumores podrían servir como nuevos blancos terapéuticos para complementar las terapias convencionales.
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2015)
    (2015) Rabassa, Martín Enrique
    En este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de cabeza y cuello y en otras localizaciones como tumores de mama y tumores de colon. Principalmente se analizó la expresión de antígenos glusídicos del grupo Lewis (lewis x y sialil Lewis x , moléculas que se hallan relacionadas con la progresión tumoral y la diseminación metastásica) y la mucina humana MUC1. Por otra parte se iniciaron las tareas de investigación referidas al aislamiento y caracterización de microvesiculas y exosomas de plasma humano obtenidas de pacientes portadoras de cáncer de mama.
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    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2014-2015)
    (2015) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama constituye una problemática de gran importancia para nuestra provincia y nuestro país por la alta tasa de incidencia que presenta esta enfermedad. Se está estudiando la expresión de IDO y Foxp3 en cortes de tumores primarios de cáncer de mama y serán cuantificados en linfocitos de sangre periférica. Por otra parte, se está analizando el infiltrado linfocitario con marcadores específicos (CD4, CD8, CD45RO y Foxp3). El subtipo molecular del tumor se establece mediante la determinación de marcadores específicos tales como Receptor de estrógenos, Receptor de progesterona, Her-2-neu y citoqueratinas basales. Por otro lado se busca relacionar el tipo de infiltrado linfocitario y la expresión de IDO, Foxp3 y mucinas con el subtipo tumoral, estadío, grado de diferenciación histológica, grado nuclear y sobrevida. También se pretende establecer las posibles asociaciones entre estos parámetros inmunológicos. Las biomoléculas asociadas a subtipos tumorales pueden servir como blanco terapéutico para impedir la proliferación de las células tumorales o bien, exacerbar la respuesta inmune dirigida hacia ellos.
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    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2012)
    (2012) Isla Larrain, Marina Teresita
    El cáncer de mama es una enfermedad de alta incidencia y mortalidad en nuestra provincia y en nuestro país, a pesar de los avances terapéuticos. La detección temprana del cáncer de mama es esencial para lograr eficacia en los tratamientos, y sumamente necesario el hallazgo de nuevas estrategias terapéuticas para aquellos subtipos de la enfermedad que no responden a los tratamientos existentes. Con el fin de contribuir con la prevención, detección precoz de los tumores primarios o de casos de recurrencia y/o metástasis como así también con la búsqueda de nuevas terapias, es necesario seguir ahondando en el conocimiento del comportamiento tumoral y de la respuesta inmune de las pacientes. En este sentido, es necesario profundizar en la búsqueda de nuevos biomarcadores útiles en pacientes con cáncer de mama como así también en mujeres con patologías benignas. Con este fin, se llevó a cabo un trabajo tendiente al estudio de la respuesta inmune humoral por medio de una adaptación de las técnicas de inmunohistoquímica e inmunocitoquímica. Se enfrentaron sueros de pacientes con líneas celulares de cáncer de mama y con tejidos tumorales de las mismas pacientes.
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2010-2011)
    (2011) Rabassa, Martín Enrique
    Durante este período se analizó la presencia de nanovesículas derivadas de tumores presentes en el plasma de pacientes portadores de cáncer. Se estudió la presencia de exosomas, una variedad de nanovesícula de 40 a 100 nm de diámetro procedente del sistema endosomal, las cuales se acumulan en la circulación periférica de pacientes con cáncer. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. De un total de 41 pacientes con cáncer de mama estudiadas 27/41 (67%) presentaron valores elevados de proteínas en las fracciones correspondientes y 17 de estas 27 (63%) fracciones mostraron marcadores de exosomas y vesículas compatibles en las imágenes de microscopía electrónica. Se analizó la presencia en los exosomas de la mucina humana MUC1, ya que la misma había sido detectada por Staubach S y colegas (2009) en exosomas derivados de la línea de células tumorales de mama MCF7. Mediante el empleo del anticuerpo HMFG1 sólo fue posible determinar la presencia de MUC1 en una sola de las muestras. Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. La presencia de IDO en fracciones de exosomas fue confirmada en 4/12 pacientes con cáncer de mama y su expresión en estas vesículas podría constituir un mecanismo de inmunoevasión tumoral a distancia. Durante este período se inició la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello (Exp 800-8421/11 UNLP) en colaboración con el Dr Martín Abba. Las proteínas romboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. El presente trabajo se encuentra orientado a estudiar la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello y su relación con los parámetros anatomoclínicos de los pacientes. Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico. Otras investigaciones iniciadas en el período anterior se encuentran en desarrollo. En colaboración con el Doctor Miguel Pasquale del INIFTA se estableció un modelo de estudio de isquemia in vitro (coverslip hypoxia) orientado a estudiar el efecto de la misma sobre la expresión de MUC1 y la producción de exosomas en líneas celulares.
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    Informe científico de investigador: Croce, María Virginia (2014-2016)
    (2016) Croce, María Virginia
    El proceso de metástasis está regulado por el “cross-talk” entre las células neoplásicas y las del microambiente tumoral. Durante este período analizamos la identidad antigénica de las células neoplásicas en los tumores primarios y metástasis hallando diferentes subpoblaciones de células neoplásicas metastásicas que expresan MUC1, antígenos Lewis y romboides 2 justificando, al menos en parte, los posibles mecanismos de escape tumoral en relación al pronóstico de los pacientes. Se determinó la traslocación al núcleo de células neoplásicas de la fracción extramembranosa de MUC1, lo que sumaría otra vía de regulación de esta mucina a la diseminación. Asimismo, realizamos el análisis de la indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), molécula inmunosupresora, hallándola expresada por las células tumorales y demostrándose la asociación del gen de IDO con otros genes relacionados con la respuesta inmune y apoptosis. Se continuó con el estudio poblacional de factores de riesgo, incidencia y prevención del cáncer de mama y el desarrollo de modelos experimentales.
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    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2013)
    (2013) Rabassa, Martín Enrique
    En este período se realizaron estudios de la expresión antigénica en tumores malignos de distintas localizaciones. Se analizó la mucina MUC1 y proteínas del grupo Rhomboide. Los ensayos estuvieron orientados a analizar la presencia de la porción extracelular de MUC1 en el núcleo celular. La mucina MUC1 consta de dos dominios, uno pequeño anclado a la membrana plasmática, el cual posee una porción intracelular relacionado con el control de señales intracelulares y otro mayor, unido de forma no covalente al menor y ubicado en el exterior celular. Esta porción se encuentra ampliamente glicosilada y se relaciona con la defensa de la célula epitelial frente a noxas o patógenos. El dominio menor puede observarse en diversas localizaciones subcelulares tales como la mitocondria o el núcleo celular. Allí interviene en la regulación de otros procesos de señales celulares, así como también la regulación de la expresión de genes. En trabajos previos de nuestro Centro habían detectado la presencia del dominio extracelular de MUC1 (MUC1-N) en el núcleo de la célula tumoral. Sin embargo, este fenómeno no había sido evaluado exhaustivamente en una serie de pacientes portadores de tumores. Con tal fin se analizó la detección de la porción extracelular de la mucina MUC1 en fracciones enriquecidas en núcleos de líneas celulares tumorales y en cortes de tumores de cabeza y cuello, colon y mama. Se observó que un porcentaje significativo de tumores de mama presentan esta localización particular de MUC1 mientras que en los tumores de cabeza y cuello y colon es un evento infrecuente. También se observó que es posible su aislamiento a partir de varias líneas celulares de cáncer de mama. (Rabassa et al, International Journal of Biological Markers, 2015) Por otra parte, se analizaron proteínas del grupo rhomboide con el objetivo de determinar la presencia de sus mRNA en exosomas del plasma de pacientes portadoras de cáncer de mama. La expresión del mRNA de algunas proteínas rhomboides se encuentran asociadas con el desarrollo de metastasis y la respuesta a drogas antineoplásicas. Su función específica no se conoce, aunque estudios recientes han observado que se localizan en el Aaparato de Golgi. A partir de las vesículas se extrajo mRNA el cual fue aislado y retrotranscripto a cDNA. A continuación se procedió a la evaluación de la expresión de diversos mRNA empleando rtPCR y sondas dirigidas contra actina y las proteínas RHBDD1, RHBDD2 y RHBDD3. Para este estudio se utilizó un pool de muestras de estadío I versus otro pool de muestras de estadios II y III de cáncer de mama. Los hallazgos muestran que no es posible detectar mRNA de RHBDD3 en exosomas circulantes de pacientes con cáncer de mama en ninguno de sus estadios mientras que RHBDD2 fue detectado en ambos pooles. Finalmente RHBDD1 sólo fue observado en las muestras en estadíos II y III lo que permite sospechar alguna relación con el proceso de desarrollo tumoral y lo cual se procederá a evaluar inmediatamente en mayor detalle. (trabajo en preparación).
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Isla Larrain, Marina Teresita (2013)
    (2013) Isla Larrain, Marina Teresita
    El estudio de los mecanismos involucrados en el desarrollo del cáncer de mama sigue siendo objeto de numerosas investigaciones a pesar del avance en las estrategias terapéuticas disponibles. Existen diferentes subtipos de la enfermedad caracterizados por diferentes biomarcadores presentes en los tumores tales como los receptores de estrógenos, de progesterona y HER2 neu. Estos subtipos determinados por detección de estos receptores proteicos se asocian con una clasificación por técnicas de biología molecular que los clasifica en: Luminal A, Luminal B, HER 2 neu enriquecido, basal y normal-like. En ciertos subtipos, no se disponen de terapéuticas óptimas para el tratamiento, tal es el caso de los tumores triple negativos, o bien no son eficaces los tratamientos disponibles. De ahí la importancia de ahondar en el conocimiento de la biología tumoral para producir avances en este sentido ya que el cáncer de mama presenta una alta incidencia y tasa de mortalidad en nuestro país y en nuestra provincia. Con el fin de contribuir con la prevención, detección precoz de los tumores primarios o de casos de recurrencia y/o metástasis como así también con la búsqueda de nuevas terapias, es necesario abordar también aspectos relacionados con la respuesta inmune de las pacientes tales como la tolerancia inmunológica y los mecanismos de escape de los que se vale el tumor para evadir al sistema inmune del huésped.
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Croce, María Virginia (2012-2014)
    (2014) Croce, María Virginia
    La diseminación tumoral constituye un complejo proceso que comprende la invasión y la metástasis o diseminación a distancia. Esta secuencia se debe a múltiples factores que incluyen marcadores tumorales del proceso, los que podrían tener utilidad clínica para el seguimiento de los pacientes con cáncer. Durante el período informado se realizó un estudio comparado de la expresión de un conjunto de antígenos asociados a cáncer de mama en tumores primarios, metástatasis cutáneas y ganglios axilares comprometidos de la misma paciente. Se trató de establecer la existencia de una expresión diferencial de los antígenos asociados en los tres tipos de muestras analizadas. Es un tema de especial interés el determinar los factores implicados en la diseminación tumoral a determinados órganos. En el análisis que realizamos durante este período se incluyeron los ganglios y las metástasis en piel. El cáncer de mama es el tumor primario sólido que con más frecuencia da esta localización metastásica y no se conocen los mecanismos que están implicados en esta diseminación.
  • Informe de investigador
    Acceso Abierto
    Informe científico de investigador: Rabassa, Martín Enrique (2012)
    (2012) Rabassa, Martín Enrique
    Durante el período correspondiente al año 2012 se estudió la presencia de exosomas en el plasma de pacientes con tumroes de cáncer de mama y a partir del medio condicionado de líneas celulares. Los exosomas son pequeñas vesículas de menos de 100 nm de diámetro que son liberadas desde el compartimento endosomal de diversas células y en particular por las células tumorales. Los exosomas fueron aislados mediante centrifugaciones diferenciales, filtración y centrifugación en gradientes de densidad y analizados mediante microscopía electrónica y estudio de antígenos específicos a través de Western blot. Se analizó la presencia en los exosomas de la lectina humana GAL1 mediante el empleo del anticuerpo policlonal de conejo y fue posible determinar la presencia de GAL1 en el 32% de las muestras y en las líneas tumorales humanas MCF7 y T47D y en las murinas B16 y 4T1 (Trabajo en preparación en colaboracion conel Dr G Rabinovich, CONICET). Por otra parte, se analizó la presencia de la enzima Indolamino 2,3-dioxigenasa (IDO) la cual participa en la degradación del triptofano a quinurenina. La expresión de la enzima y sus derivados han sido relacionados con fenómenos de tolerancia inmunológica al interferir con la actividad antitumoral de los linfocitos activados y al favorecer la actividad de linfocitos reguladores. Empleando Western blot se hallaron 4/11 muestras positivas. (Trabajo en preparación en colaboración con la Dra Isla Larrain, CIC-PBA) Se analizó la expresión nuclear de la mucina humana MUC1 en tumores de cabeza y cuello, colon y mama mediante inmunohistoquímica y Western blot. En particular se estudió la presencia de la porción extracelular, la cual a sido recientemente asociada con las motas nucleares. (Trabajo terminado, aun no enviado para su publicación) Durante este período se continuó la investigación de la expresión de la proteína RHBDD2 en pacientes con tumores de cabeza y cuello en colaboración con el Dr Martín Abba (CONICET) Las proeteínas rhomboide son una familia altamente conservada de proteínas que poseen múltiples funciones, entre las cuales se destaca un rol regulador de la vía de señalización del EGFR (factor de crecimiento epidermoide). La expresión de RHBDD2 ha sido asociada con el pronóstico de pacientes con cáncer de mama. En el presente trabajo se estudió la expresión de la proteína RHBDD2 en 124 pacientes con tumores de cabeza y cuello. El manuscrito se encuentra en preparación. En relación con el mismo tema pero en líneas de cáncer de colon se analizó la expresión de RHBDD2 a nivel de microcopía electrónica (Trabajo publicado) Además, en colaboración con la Dra. María González Baró del INIBIOLP-CONICET, se analizó mediante inmunihistoquímica e inmunofluorescencia, la expresión de la enzima GPAT2. En cortes de testículo de rata de distintas edades y en microarreglos de tejidos tumorales mamarios se estudió la expresión de la enzima con el fin de determinar su relación con la síntesis de glicerolípidos durante la epermatogénesis de la rata y el proceso neoplásico