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    Acceso Abierto
    Centro de Investigación de Proteínas Vegetales: pasado, presente y perspectivas
    (2018) Obregón, Walter David; Vairo Cavalli, Sandra; Bruno, Mariela Anahí; Morcelle del Valle, Susana
    El actual Centro de Investigación de Proteínas Vegetales (CIProVe) fue creado como Laboratorio de Investigación de Proteínas Vegetales (LIProVe) en 1992 y es uno de los principales grupos de Latinoamérica dedicado a estudios básicos y aplicados de proteínas de origen vegetal. En 2016 pasó a ser Centro Asociado de la CICPBA. Históricamente, se han realizado investigaciones vinculadas a la purificación, caracterización y aplicación de peptidasas de origen vegetal en diversos procesos de interés industrial, tales como tratamiento de efluentes, curtido de cueros, elaboración de quesos y otros productos y aditivos alimentarios. Las líneas actuales que lideran los investigadores activos del Centro incluyen la producción de hidrolizados a partir de proteínas alimentarias que contengan péptidos bioactivos y la exploración de dichas actividades, la clonación y expresión de defensinas vegetales y otros dominios proteicos con potencial actividad antimicrobiana, el screening de inhibidores de peptidasas provenientes de diversas especies vegetales y el empleo de lipasas y proteasas de plantas autóctonas como biocatalizadores, en la obtención de surfactantes derivados de aminoácidos y el estudio de sus propiedades. En base a esto, se plantea un proyecto, en el que confluirían todas las líneas mencionadas, destinado a la búsqueda, generación y estudio de compuestos antimicrobianos novedosos, a través de distintas estrategias.
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    Acceso Abierto
    Peptidasas aspárticas de flores de Asteraceae con potencial aplicación biotecnológica
    (2016) Colombo, María Laura; Liggieri, Constanza Silvina; Vairo Cavalli, Sandra
    En las últimas décadas el interés por las peptidasas se ha incrementado significativamente. La gran mayoría de las enzimas comerciales que se emplean se obtienen principalmente de microorganismos. Sin embargo, también pueden ser extraídas de especies vegetales que se presentan como una fuente promisoria de estas moléculas. De hecho, las peptidasas vegetales son ampliamente utilizadas en la industria alimentaria, farmacéutica, biotecnológica y de detergentes, y son candidatas atractivas para el desarrollo de nuevos fármacos y en terapias combinadas. Están ampliamente distribuidas en los organismos vivos. Típicamente presentan un prodominio autoinhibitorio, que debe ser eliminado para activar la enzima. Si bien todas llevan a cabo la misma reacción que consiste en la hidrólisis de los enlaces peptídicos de las proteínas, difieren sin embargo, en la especificidad de sustrato, pH óptimo, la temperatura y otros parámetros que hacen que sus propiedades sean únicas, mostrando una gran diversidad funcional. Dentro de estas moléculas, las peptidasas aspárticas (PAs), constituyen una de las principales clases de peptidasas. Las flores de cardo (familia Asteraceae) son una fuente rica de PAs. Con el fin de asegurar una fuente continua de dichas enzimas, las mismas pueden ser obtenidas de su fuente natural o por métodos recombinantes. Debido a sus propiedades características se emplean en diversos procesos industriales. Ejemplos de aplicaciones tradicionales de estas peptidasas como fabricación de queso así como otras aplicaciones promisorias como la obtención de péptidos bioactivos con actividad antimicrobiana y citotóxica, acción en la remodelación de la matriz extracelular, inmovilización en esponjas de quitosano, catalizadores en medios orgánicos son discutidas en esta revisión.
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    Acceso Abierto
    β-carbonic anhydrases play a role in salicylic acid perception in Arabidopsis
    (2017) Medina-Puche, Laura; Castello, María José; Canet, Juan Vicente; Lamilla, Julián; Colombo, María Laura; Tornero, Pablo
    The plant hormone salicylic acid (SA) is required for defense responses. NON EXPRESSER OF PATHOGENESIS RELATED 1 (NPR1) and NON RECOGNITION OF BTH-4 (NRB4) are required for the response to SA in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana). Here, we isolated several interactors of NRB4 using yeast two-hybrid assays. Two of these interactors, βCA1 and βCA2, are β-carbonic anhydrase family proteins. Since double mutant βca1 βca2 plants did not show any obvious phenotype, we investigated other βCAs and found that NRB4 also interacts with βCA3 and βCA4. Moreover, several βCAs interacted with NPR1 in yeast, including one that interacted in a SA-dependent manner. This interaction was abolished in loss-of-function alleles of NPR1. Interactions between βCAs and both NRB4 and NPR1 were also detected in planta, with evidence for a triple interaction, NRB4- βCA1-NPR1. The quintuple mutant βca1 βca2 βca3 βca4 βca6 showed partial insensitivity to SA. These findings suggest that one of the functions of carbonic anhydrases is to modulate the perception of SA in plants.
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    Acceso Abierto
    Biochemical and MALDI-TOF Mass Spectrometric Characterization of a Novel Native and Recombinant Cystine Knot Miniprotein from Solanum tuberosum subsp. andigenum cv. Churqueña
    (MDPI (Multidisciplinary Digital Publishing Institute), 2018) Cotabarren, Juliana; Tellechea, Mariana Edith; Tanco, Sebastián Martín; Lorenzo, Julia; Garcia-Pardo, Javier; Avilés, Francesc Xavier; Obregón, Walter David
    Cystine-knot miniproteins (CKMPs) are an intriguing group of cysteine-rich molecules that combine the characteristics of proteins and peptides. Typically, CKMPs are fewer than 50 residues in length and share a characteristic knotted scaffold characterized by the presence of three intramolecular disulfide bonds that form the singular knotted structure. The knot scaffold confers on these proteins remarkable chemical, thermal, and proteolytic stability. Recently, CKMPs have emerged as a novel class of natural molecules with interesting pharmacological properties. In the present work, a novel cystine-knot metallocarboxypeptidase inhibitor (chuPCI) was isolated from tubers of Solanum tuberosum, subsp. andigenum cv. Churqueña. Our results demonstrated that chuPCI is a member of the A/B-type family of metallocarboxypeptidases inhibitors. chuPCI was expressed and characterized by a combination of biochemical and mass spectrometric techniques. Direct comparison of the MALDI-TOF mass spectra for the native and recombinant molecules allowed us to confirm the presence of four different forms of chuPCI in the tubers. The majority of such forms have a molecular weight of 4309 Da and contain a cyclized Gln in the N-terminus. The other three forms are derived from N-terminal and/or C-terminal proteolytic cleavages. Taken together, our results contribute to increase the current repertoire of natural CKMPs.
  • Documento de conferencia
    Acceso Abierto
    Caracterización de las propiedades fisicoquímicas y del mecanismo de interacción con membranas biológicas de surfactantes derivados de arginina
    (2017) Hermet, Melisa; Fait, María Elisa; Morcelle del Valle, Susana; Bakás, Laura Susana
    Se caracterizaron algunas propiedades fisicoquímicas de dos surfactantes derivados de arginina, Bz-Arg-NHC10 y Bz-Arg-NHC12, así como su interacción con membranas biológicas utilizando glóbulos rojos humanos (GRH) como sistema modelo. Dichos compuestos fueron capaces de reducir la tensión superficial del agua a un valor constante, y mostraron además concentraciones micelares críticas (CMC) definidas. La observación de agregados cilíndricos de Bz-Arg-NHCn a través de microscopía de fuerza atómica corroboró las predicciones basadas en los valores del parámetro de empaquetamiento. Los estudios de la actividad hemolítica evidenciaron que la solubilización de la membrana de GRH es inducida por los agregados de los surfactantes, ya que solo se observó lisis celular a concentraciones mayores que sus respectivas CMC. Los cambios morfológicos observados en los GRH expuestos a los surfactantes demostraron la existencia de dos fenómenos involucrados en el mecanismo hemolítico: la incorporación de monómeros de surfactante en la capa externa de la membrana de los GRH, que provoca su desestabilización con la consiguiente formación de equinocitos y liberación de microvesículas, y la extracción de los componentes de la membrana, resultante de colisiones con los agregados de los surfactantes, lo que provoca una disminución del área relativa de la capa externa y favorece la aparición de estomatocitos.
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    Acceso Abierto
    Proteasas presentes en el látex de frutos de Maclura pomifera (Raf.) Schneid. (Moraceae)
    (1989) López , Laura María Isabel; Natalucci, Claudia Luisa; Caffini, Néstor Oscar
    Latex obtained by superficial incisions of Machra pomifera fruits, received on cold neutral phosphate buffer and centrifuged to remove gummy material, affords a crude extract with higher proteolylic activity between pH 8.75 and 10.6 and a notably thermal stability that can be advantageously kept as lyophyhed powder. Acetone precipitation followed by ion exchange chromatography (DEAE-Sepharose CL-6B and CM-Sepharose CL-6B) allows the purification of three active fractions.
  • Artículo
    Acceso Abierto
    Análisis del contenido de carotenoides florales de plantas que crecen en la provincia de Buenos Aires (Argentina)
    (1982) Natalucci, Claudia Luisa
    Flowers of nineteen wild and cultivated species growing in the Province of Buenos Aires have been investigated for their total carotenoid, carotene, mono- and dihidroxycarotenoid contents. Yellow and orange floral varieties of Tagetes erecta L. were also studied for comparative purposes. Carotenes are the main fraction in six species and xanthophylls in the others. Within the latter is Ranunculurs repens L., with a total carotenoid content even higher than the orange variety of T. erecta.
  • Artículo
    Acceso Abierto
    Un método electroforético mejorado destinado al análisis de caseína bovina
    (2002) Pardo, Marcelo F.; Natalucci, Claudia Luisa
    An alternative electrophoretic method that improves the separation, identification and relative quantification of bovine milk casein fractions and casein hydrolysates was developed. The method is based in the Tricine-SDS-PAGE technique while the relative quantification of milk proteins has been achieved by digital densitometry. The advantages of this procedure for milk proteins and milk protein hydrolysates\nare that bands are well separated and can be readily detected and quantified. In the new method, ás1 -, ás2-, â- and ê -casein and low molecular weight peptides (casein degradation products with high electrophoretic mobility) that cannot be usually detected by other electrophoretic systems are visualized as sharp bands.
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    Proteasas de bromeliaceae: I. Estudio preliminar de la fracción proteolíticamente activa presente en frutos de Bromelia laciniosa Mart.
    (1984) Buttazzoni de Cozzarin, Marta Susana; Caffini, Néstor Oscar; Priolo de Lufrano, Nora Silvia; Natalucci, Claudia Luisa
    Proteolitically active preparations obtained from matute fruits of Brornelia Iaciniosa Mart. were analyzed by molecular sieve chromatography (Sephadex G-75, Superhe). Best resolution and higher activity are achieved by direct trituration of fruits with cold acetone. Proteolytic capacity is notably diminished in case of unripe fruits.
  • Artículo
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    Caracterización parcial de una proteinasa coagulante de la leche aislada del alcaucil (Cynara scolymus L., Asteraceae)
    (1997) Llorente, Berta Elizabet; Brutti, Cristina B.; Caffini, Néstor Oscar; Natalucci, Claudia Luisa
    The presence of proteinases in Cynara scolyrnus L. ( artichoke ) has been investigated by determining the proteolytic and milk clotting activities of crude extracts of different parts of the inflorescence in various stages of development, as well as of leaves and roots. Although all the preparations showed a certain extent of proteolytic activity, only those of adult leaves, pappus, and immature and mature flowers were able to clot milk. The extract of the upper (violet) part of mature flowers exhibited optimum activity at acid pH values (90% of maximum activity at pH 3.5 - 5.0) which was strongly inhibited by pepstatine A, suggesting the presence of aspartic proteinases. This extract had a low thermal stability at temperatures above 45ºC, which could be a useful property in cheese making process, as it could be quickly inactivated by moderate heating.
  • Artículo
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    Proteasas de Bromeliaceae: II. Separación, caracterización y fraccionamiento de una proteasa aislada de frutos de Bromelia Hieronymi Mez.
    (1985) Priolo de Lufrano, Nora Silvia; Buttazzoni de Cozzarin, Marta Susana; Caffini, Néstor Oscar; Natalucci, Claudia Luisa
    A partir de frutos verdes de Bromelia hieronymi Mez se obtuvieron dos preparaciones proteolíticamente activas, que manifiestan su máximo poder caseinolítico a 60ºC y pH 6.85, observándose un segundo pico a pH 7.57. Al ser sometidas a cromatografías de intercambio aniónico (DEAE-Sephacel) ambas preparaciones se resuelven en tres fracciones activas: la primera de ellas es la de mayor potencialidad proteolítica, pero no es contenida por el intercambiador usado, aunque si por uno catiónico (SP Sephadex C50), que la descompone en dos fracciones proteicas, una de las cuales retiene la capacidad caseinolítica
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    Acceso Abierto
    Estudio preliminar de "Macrodontina", una nueva cisteinilproteinasa aislada de frutos de Pseudananas macrodontes (Morr.) Harms (Bromeliaceae)
    (1994) Brullo, Adriana; Hilal, Rosana M.; Caffini, Néstor Oscar; Natalucci, Claudia Luisa
    From inmature fruits of Pseudananas macrodontes (Morr.) Harms, known as ihvirá in the northeast of Argentina, has been isolated and partially characterized a sulfhydril-protease highly active between pH 7 and 10. The acetonic precipitates are quite stable at temperatures below 45ºC and not affected by freezing or liophylization. Anionic exchange chromatography (DEAE-Sepharose Fast Flow) affords two active fractions, both well resolved by gel filtration (Sephadex G-75). The electrophoretic pattern (SDS-PAGE) of the acetonic precipitate shows six protein fractions, between 14 and 67 kDa, but the zymogram reveals the presente of three active fractions, of about 27,30, arid 54 kDa.
  • Artículo
    Acceso Abierto
    Proteasas de Bromeliaceae: V. Separación y purificación de sulfhidril - proteasas presentes en frutos de Bromelia balaasae Mez
    (1988) Priolo de Lufrano, Nora Silvia; López , Laura María Isabel; Caffini, Néstor Oscar; Natalucci, Claudia Luisa
    Almost ripe fruits of Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae) were blade homogeneized within cold (-20 O C ) acetone, providing a crude preparation that could be partialiy solubllized in phosphate buffer (pH 6,4) containing EDTA and cysteine 5 mM. Solutions hydrolize casein (maximum a c t ~ t ypH 6.25-8.5O), the activity being enhanced by addition of cysteine. The crude enzyme was purified by molecular sieve chromatography (Sephadex G-75, Superfme) and ion exchange chromatography (DEAE- and CM-Sepharose). Three proteolitically active fractions were thus obtained
  • Artículo
    Acceso Abierto
    Proteasas de Bromeliaceae: III. Condiciones óptimas de acción, estabilidad y purificación de la proteasa aislada de frutos de Bromelia laciniosa Mart.
    (1986) Priolo de Lufrano, Nora Silvia; Buttazzoni de Cozzarin, Marta Susana; Caffini, Néstor Oscar; Natalucci, Claudia Luisa
    A partir de frutos maduros de Bromelia Laciniosa Mart., se obtuvo una proteasa que manifiesta su máxima actividad caseinolítica a 60 ºC y pH 6,4. El agregado de cisteína incrementa notoriamente la capacidad proteolítica y aumenta la estabilidad de la enzima a temperaturas elevadas. El pasaje de la proteasa no purificada a través de Sephadex G-75 permite separar tres fraccione,una de las cuales (peso molecular 15.000-20.000) retiene la actividad proteolítica: esta última se resuleve en al menos tres fracciones (solamente una de ellas activa) por intercambio iónico sobre DEAE-Sephacel con gradiente lineal de cloruro de sodio 0,2-0,8 M